Bepaling amygdaline in amandel kernen met behulp van de HPLC
Inleiding
Amygdaline is een cyanogene glycoside die gevonden kan worden in de kernen en pitten van steenvruchten. Amygdaline wordt in het menselijke maag- darmkanaal afgebroken in verschillende componenten waaronder het giftige cyanide.doormiddel van een extractie proces kan de amygdaline met behulp van een HPLC gemeten worden.
Maak voor alle gebruikten chemicaliën een veiligheidskaart.
Reagentia en apparatuur
- HPLC (nutricia) met:
- Kolom: Chromspher C-18
- Detector: UV 214 nm
- Eluens: Methanol/water in de verhouding 25:75 % (v/v)
- Instellingen HPLC
- Flow: 1 ml/min
- Runtime: 15 min
- Kolom temperatuur: 40 graden Celsius
- Blender
- Rotatie verdamper
- Rondbodemkolf (500ml)
- Rondbodemkolf (250ml)
- PTFE-filters
- Verwarmingsmantel
- Refluxkoeler
- Kooksteentjes
- S&S 595 rondfilter
- Standaardoplossing 100 mg/l amygdaline
- Ongezouten en ongeroosterde amandelpitten 5 gram
- Ethanol 96%
- Diethyl-ether
Werkwijze
Extractie opstelling
Standaardreeks amygdaline:
Maak met de amygdaline standaardoplossing van 100 mg/l een standaardreeks van 5; 10; 20; 40 en 50 mg/l
Amygdaline extractie (DUPLO):
- Maal 5 gram pitten in een blender.
- Weeg hiervan 2 gram af in een rondbodemkolf van 250 ml, voeg hier 50 ml ethanol en kooksteentjes aan toe.
- Plaats de rondbodemkolf in een mantelverwarmer, sluit een refluxkoeler aan de rondbodemkolf aan. Zet de mantelverwarmer aan op 78,5 graden Celsius voor 80 minuten. Zie afbeelding voor opstelling extractie.
- Filter het extract in een rondbodemkolf van 250 ml.
- Plaats de rondbodemkolf aan de rotatie verdamper ( 70mBar, 35 graden Celsius) tot alle ethanol is verdampt. (Rotatie verdamper staat in s3.36 in de zuurkast, handleiding ligt erbi)
- Voeg 10 ml diethyl ether toe aan het monster en laat dit overnacht verdampen in de zuurkast.
- Voeg 5 ml eluens toe aan het monster en breng dit kwantitatief over in een maatkolf van 50 ml.
- Filtreer een deel van het monster met behulp van een PTFE-filter en breng dit over in een vial om te meten met de HPLC.
LET OP!
In geval dat er een vetlaag op het monster zichtbaar is na het toevoegen van het eluens, het monster in Bleckman centrifuge centrifugeren op de hoogste stand voor tien minuten. vervolgens de vetlaag afpipetteren en verwijderen.
Controlemonster:
- Meet het controlemonster in duplo mee met het monster.
Uitwerking
Verwerk de data in een overzichtelijk excel bestand.
Noteer hierbij de piek oppervlakken met bijbehorende retentie tijden. Amgdaline heeft twee pieken verwerk deze beide in het excel sheet.
Afval
