## Werkwijze

Voor de standaardreeks wordt de verdunde stock-oplossing gebruikt. Als de stock-standaard op is, moet deze opnieuw worden gemaakt.

- Stock-standaard carbamazepine 1 mg/ml, weeg 100 mg carbamazepine in een maatkolf van 100 ml en vul aan met methanol.

Maak vanuit de stock-standaard een verdunning.

- Stock-verdunning carbamazepine 10 μg/ml, pipeteer 100 μl van de stock carbamazepine in een maatkolf van 10 ml. Vul de maatkolf aan met methanol.

Werkwijze:

Alles wordt direct in vails gepipeteerd.

Pipeteer volgens onderstaand schema

Naam | Pipeteren Vst (µl) | Pipeteren CM (µl) | Pipeteren M (µl) | Concentratie (µg/ml)
C1 | 225 |  |  | 1,5
C2 | 450 |  |  | 3
C3 | 675 |  |  | 4,5
C4 | 900 |  |  | 6
C5 | 1125 |  |  | 7,5
C6 | 1350 |  |  | 9
CM |  | 500 |  | ?
CM |  | 500 |  | ?
M1 |  |  | 500 | ?
M2 |  |  | 500 | ?

1. Vul alle vails tot 1,5 ml met methanol.
2. Meng alle vials minimaal 30 sec op de vortex.
3. Als de oplossingen troebel zijn --> ga naar stap 4. Als de oplossingen helder zijn --> ga naar stap 5.
4. Doe alle vails in de centrifuge en laat deze op 4200 rpm 10 min draaien.
5. Zet alle vails in de HPLC.

De volgende stappen zijn allemaal op de HPLC. Als iets niet te vinden is, bekijk de instructievideo van dhr. Dousma.

- Open het mapje ‘20200708 MN test 3’ op de HPLC (deze is te vinden op HPLC 1, leerjaar 3).

- Zorg dat alle instellingen gecontroleerd zijn (instellingen staan onderaan de pagina).

- Purge de HPLC met het juiste eluens.

- Laat de kolom 10 min doorspoelen met het eluens (er moet constante druk zijn).

- Zet de run op de HPLC aan.

Instellingen:

- Run time: 15 min

- Flow-rate: 1,0 ml/min

- Eluens: 18 acetonitrol: 19 methanol: 63 milliQ (v/v/v)

- Kolom: μ-Bondapak C18 (150 mm x 4,6 mm i.d.)

- UV-detector: 284 nm

- Injectie volume: 50 μl

- Minimale pomp druk: 10 bar

- Maximale pomp druk: 200 bar

- Needle stroke: 31 mm (docent vragen of dit klopt aan de hand van de vails)