Voor de standaardreeks wordt de verdunde stock-oplossing gebruikt. Als de stock-standaard op is, moet deze opnieuw worden gemaakt.
- Stock-standaard carbamazepine 1 mg/ml, weeg 100 mg carbamazepine in een maatkolf van 100 ml en vul aan met methanol.
Maak vanuit de stock-standaard een verdunning.
- Stock-verdunning carbamazepine 10 μg/ml, pipeteer 100 μl van de stock carbamazepine in een maatkolf van 10 ml. Vul de maatkolf aan met methanol.
Werkwijze:
Alles wordt direct in vails gepipeteerd.
Pipeteer volgens onderstaand schema
Naam |
Pipeteren Vst (µl) |
Pipeteren CM (µl) |
Pipeteren M (µl) |
Concentratie (µg/ml) |
C1 |
225 |
|
|
1,5 |
C2 |
450 |
|
|
3 |
C3 |
675 |
|
|
4,5 |
C4 |
900 |
|
|
6 |
C5 |
1125 |
|
|
7,5 |
C6 |
1350 |
|
|
9 |
CM |
|
500 |
|
? |
CM |
|
500 | ? | |
M1 |
|
|
500 |
? |
M2 |
|
|
500 |
? |
De volgende stappen zijn allemaal op de HPLC. Als iets niet te vinden is, bekijk de instructievideo van dhr. Dousma.
- Open het mapje ‘20200708 MN test 3’ op de HPLC (deze is te vinden op HPLC 1, leerjaar 3).
- Zorg dat alle instellingen gecontroleerd zijn (instellingen staan onderaan de pagina).
- Purge de HPLC met het juiste eluens.
- Laat de kolom 10 min doorspoelen met het eluens (er moet constante druk zijn).
- Zet de run op de HPLC aan.
Instellingen:
- Run time: 15 min
- Flow-rate: 1,0 ml/min
- Eluens: 18 acetonitrol: 19 methanol: 63 milliQ (v/v/v)
- Kolom: μ-Bondapak C18 (150 mm x 4,6 mm i.d.)
- UV-detector: 284 nm
- Injectie volume: 50 μl
- Minimale pomp druk: 10 bar
- Maximale pomp druk: 200 bar
- Needle stroke: 31 mm (docent vragen of dit klopt aan de hand van de vails)