IJzer(II)-ionen geven in een oplossing met een pH van 2 tot 9 met ortho-fenantroline een oranjerood gekleurd complex met de formule:
[(C12N2H8)3Fe]2+.
De extinctie, bij de juiste golflengte gemeten, is een maat voor de concentratie aan ijzer(II)-ionen in de oplossing.
Om eventueel aanwezige ijzer(III)-ionen te reduceren tot ijzer-(II)-ionen wordt hydroxylammoniumchloride toegevoegd.
De oplossing wordt gebufferd door toevoeging van ammoniumacetaat (pH ca. 5 tot 7). Hieruit ontstaat (samen met het in de oplossing aanwezige zuur) een azijnzuur/ammoniumacetaat buffer.