Voorschrift 01: Carbamazepine in serum met de HPLC

Voorschrift 01: Carbamazepine in serum met de HPLC

Voorschrift 01: Carbamazepine in serum met de HPLC

Inleiding

Carbamazepine is een anti-epilepticum, het beperkt snel een overprikkelde hersenlading, hierdoor word je in feite wat rustiger. Vanuit de hersenen worden continu elektrische ladingen doorgegeven aan het lichaam, door deze elektrische ladingen kan er beweging plaatsvinden. Carbamazepine kan helpen bij epilepsie, zenuwpijn, bipolaire stoornis manie, diabetes insipidus maar ook bij ontwenningsverschijnselen van een verslaving. Carbamazepine heeft een lage chronische toxiciteit, hierdoor kan het goed worden toegepast zonder ernstig letsel op de lange duur. Hierdoor is het voor de patiënt veilig te gebruiken, zonder dat er zorgen hoeven ze zijn over schade achteraf.

 

Referentiewaarden:

Therapeutisch:  4 - 12 µg/ml

Toxisch:  > 15 µg/ml

Reagentia en apparatuur

Reagentia

- Stock-standaard carbamazepine (1 mg/ml in methanol)

- Eluens: 18 Acetonitril: 19 methanol: 63 milliQ (v/v/v)

 

Apparatuur

- High performance liquid chromatography met UV-detector

- Centrifuge

Werkwijze

Voor de standaardreeks wordt de verdunde stock-oplossing gebruikt. Als de stock-standaard op is, moet deze opnieuw worden gemaakt.

- Stock-standaard carbamazepine 1 mg/ml, weeg 100 mg carbamazepine in een maatkolf van 100 ml en vul aan met methanol.

 

Maak vanuit de stock-standaard een verdunning.

- Stock-verdunning carbamazepine 10 μg/ml, pipeteer 100 μl van de stock carbamazepine in een maatkolf van 10 ml. Vul de maatkolf aan met methanol.

 

Werkwijze:

Alles wordt direct in vails gepipeteerd.

Pipeteer volgens onderstaand schema

Naam

Pipeteren Vst (µl)

Pipeteren CM (µl)

Pipeteren M (µl)

Concentratie (µg/ml)

C1

225

 

 

1,5

C2

450

 

 

3

C3

675

 

 

4,5

C4

900

 

 

6

C5

1125

 

 

7,5

C6

1350

 

 

9

CM

 

500

 

?
CM

 

 500   ?

M1

 

 

500

?

M2

 

 

500

?

 

  1. Vul alle vails tot 1,5 ml met methanol.
  2. Meng alle vials minimaal 30 sec op de vortex.
  3. Als de oplossingen troebel zijn --> ga naar stap 4. Als de oplossingen helder zijn --> ga naar stap 5.
  4. Doe alle vails in de centrifuge en laat deze op 4200 rpm 10 min draaien.
  5. Zet alle vails in de HPLC.

 

De volgende stappen zijn allemaal op de HPLC. Als iets niet te vinden is, bekijk de instructievideo van dhr. Dousma.

- Open het mapje ‘20200708 MN test 3’ op de HPLC (deze is te vinden op HPLC 1, leerjaar 3).

- Zorg dat alle instellingen gecontroleerd zijn (instellingen staan onderaan de pagina).

- Purge de HPLC met het juiste eluens.

- Laat de kolom 10 min doorspoelen met het eluens (er moet constante druk zijn).

- Zet de run op de HPLC aan.

 

Instellingen:

- Run time: 15 min

- Flow-rate: 1,0 ml/min

- Eluens: 18 acetonitrol: 19 methanol: 63 milliQ (v/v/v)

- Kolom: μ-Bondapak C18 (150 mm x 4,6 mm i.d.)

- UV-detector: 284 nm

- Injectie volume: 50 μl

- Minimale pomp druk: 10 bar

- Maximale pomp druk: 200 bar

- Needle stroke: 31 mm (docent vragen of dit klopt aan de hand van de vails)

 

Uitwerking

Maak een meetrapport en met daarin een ijklijn en de gevonden concentraties.

Bereken de concentraties van het controle monster en het monster aan de hand van de ijklijn.

Let daarbij goed op de eenheden van de concentraties.

Afval

De vials gaan allemaal in afvalvat 3.

  • Het arrangement Voorschrift 01: Carbamazepine in serum met de HPLC is gemaakt met Wikiwijs van Kennisnet. Wikiwijs is hét onderwijsplatform waar je leermiddelen zoekt, maakt en deelt.

    Auteur
    Ioniers
    Laatst gewijzigd
    13-04-2021 22:20:52
    Licentie

    Dit lesmateriaal is gepubliceerd onder de Creative Commons Naamsvermelding 4.0 Internationale licentie. Dit houdt in dat je onder de voorwaarde van naamsvermelding vrij bent om:

    • het werk te delen - te kopiëren, te verspreiden en door te geven via elk medium of bestandsformaat
    • het werk te bewerken - te remixen, te veranderen en afgeleide werken te maken
    • voor alle doeleinden, inclusief commerciële doeleinden.

    Meer informatie over de CC Naamsvermelding 4.0 Internationale licentie.

    Aanvullende informatie over dit lesmateriaal

    Van dit lesmateriaal is de volgende aanvullende informatie beschikbaar:

    Eindgebruiker
    leerling/student
    Moeilijkheidsgraad
    gemiddeld
    Studiebelasting
    4 uur 0 minuten

  • Downloaden

    Het volledige arrangement is in de onderstaande formaten te downloaden.

    Metadata

    LTI

    Leeromgevingen die gebruik maken van LTI kunnen Wikiwijs arrangementen en toetsen afspelen en resultaten terugkoppelen. Hiervoor moet de leeromgeving wel bij Wikiwijs aangemeld zijn. Wil je gebruik maken van de LTI koppeling? Meld je aan via info@wikiwijs.nl met het verzoek om een LTI koppeling aan te gaan.

    Maak je al gebruik van LTI? Gebruik dan de onderstaande Launch URL’s.

    Arrangement

    IMSCC package

    Wil je de Launch URL’s niet los kopiëren, maar in één keer downloaden? Download dan de IMSCC package.

    Voor developers

    Wikiwijs lesmateriaal kan worden gebruikt in een externe leeromgeving. Er kunnen koppelingen worden gemaakt en het lesmateriaal kan op verschillende manieren worden geëxporteerd. Meer informatie hierover kun je vinden op onze Developers Wiki.

  • Wikiwijs is een dienst van